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      人水通道蛋白-4 ELISA 檢測試劑盒操作及注意
      更新時間:2012-07-02   點擊次數(shù):1185次

      人水通道蛋白-4  ELISA 檢測試劑盒操作及注意

      操作步驟

      1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。

      2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液11稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。

      3. 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。  人水通道蛋白-4  ELISA 檢測試劑盒

      4. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。

      5. 每孔加入60ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。

      6. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。

      7. 每孔加入底物AB50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。

      8. 取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。

       

      9. 450nm波長處測定各孔的OD值。

      操作注意事項

      1. 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。

      2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。

      3. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。人水通道蛋白-4  ELISA 檢測試劑盒

      4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物AB液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。

      5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

      6. 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

      7. 底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

      8. 加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。人水通道蛋白-4  ELISA 檢測試劑盒

      按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

       

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