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      細胞培養(yǎng)基傳代轉(zhuǎn)讓方法及分析色譜技術(shù)
      更新時間:2014-07-25   點擊次數(shù):721次

      細胞培養(yǎng)基傳代轉(zhuǎn)讓方法及分析色譜技術(shù)

      細胞培養(yǎng)基傳代轉(zhuǎn)讓方法:

          (1) 、細胞培養(yǎng)基試驗準備:200ul/1mlTip頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌),酒精棉球,廢液缸,試管架,微量移液器,記號筆,培養(yǎng)皿,離心管。

        (2) 、棄掉培養(yǎng)基皿中的培養(yǎng)基,用1ml的PBS溶液洗滌兩次。

        (3) 、用Tip頭加入1ml Trypsin液,消化1分鐘(37。C,5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁,觀察到細胞*從壁上脫落下來為止。

        (4) 、加入1ml的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。

        (5) 、用Tip頭多次吹吸,使細胞*分散開。

        (6) 、將培養(yǎng)液裝入離心管中,1000rpm離心5min。

        (7) 、用培養(yǎng)液重懸細胞,細胞計數(shù)后選擇0.8X106個細胞加入一個35mm培養(yǎng)皿。

        (8) 、將合適體積*培養(yǎng)液加入離心管中,混勻細胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中,使其均勻分布。

        (9) 、將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),第二天轉(zhuǎn)染。 

          細胞培養(yǎng)基分析色譜是制備色譜的基礎(chǔ)。當我們在分析色譜上取得了良好的分離效果時,可以將其放大,應(yīng)用到制備色譜上,由此,我們需要考慮調(diào)整上樣量,流速,梯度。

        1、上樣量的調(diào)整:他與分析色譜柱和制備色譜柱的柱長和柱內(nèi)徑有關(guān):

        具體關(guān)系時;制備柱上樣量/分析柱上樣量=制備豬場/分析柱長*制備柱內(nèi)徑的平方/分析柱內(nèi)徑的平方。

        2、流速的調(diào)整:

        制備柱流速/分析柱流速=制備柱體積/分析柱體積=制備柱長/分析柱長*制備柱內(nèi)徑的平方/分析柱內(nèi)徑的平方。

        3、梯度的調(diào)整:

        制備柱梯度/分析柱梯度=制備柱體積/分析柱體積*制備柱流速/分析柱流速。

       

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