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      elisa試劑盒白介素類干擾因素的研究
      更新時(shí)間:2018-02-28   點(diǎn)擊次數(shù):1036次

      elisa試劑盒白介素類應(yīng)用價(jià)值。
      (2)改變酶標(biāo)抗體:由于RF結(jié)合的是IgG的Fc片段,如果將待酶標(biāo)的抗體的F,片段酶切去除,僅留下具有特異結(jié)合功能的F(ab’)2部分標(biāo)記酶,則在測定中即可避免RF的干擾。
      (3)標(biāo)本中RF用變性IgG預(yù)先封閉:將經(jīng)熱變性(63℃,10 min)的動(dòng)物如兔、羊等的IgG加入到標(biāo)本稀釋液中,或是將該變性IgG連接至一顆粒固相如聚苯乙烯微球或微孔,然后加入臨床血清標(biāo)本,反應(yīng)后,再吸出標(biāo)本進(jìn)行檢測。此外,在測定特異IgM時(shí),也可使用抗人IgG去除臨床標(biāo)本中RF和IgG。
      (4)測定抗原時(shí),可在標(biāo)本中加入可使RF降解的還原劑:如2—巰基乙醇。2—巰基乙醇等還原劑可使抗體內(nèi)的巰基裂解,因而可以去除RF的干擾,但只適用于抗原測定。
      (5)包被或酶標(biāo)二抗使用特異的雞抗體IgY:RF不與雞IgY反應(yīng),如果包被和酶標(biāo)二抗均為雞IgY抗體,則不受標(biāo)本中RF的干擾。
      2.補(bǔ)體 在固相酶免疫測定中,來自哺乳動(dòng)物的固相特異抗體和酶標(biāo)二抗均有激活人補(bǔ)體系統(tǒng)的功能。一方面,固相抗體和酶標(biāo)二抗可因?yàn)槠湓诠滔辔郊敖Y(jié)合過程中,抗體分子發(fā)生變構(gòu),從而其F,段的補(bǔ)體C1,結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來,這樣C1,就成為一個(gè)中介物將二者交聯(lián)起來,從而出現(xiàn)假陽性結(jié)果。另一方面,固相抗體也會(huì)因?yàn)榛罨a(bǔ)體的結(jié)合,封閉抗體的抗原表位結(jié)合能力,而引起假陰性結(jié)果或使定量測定結(jié)果偏低。由補(bǔ)體引起的干擾可通過下述方法避免:
      (1)對(duì)臨床血清標(biāo)本加熱滅活補(bǔ)體:采用56~C30 min加熱可使標(biāo)本中的補(bǔ)體C1。滅活。
      (2)包被或酶標(biāo)二抗使用特異的雞抗體:雞抗體不激活人的補(bǔ)體系統(tǒng),因此,使用特異的雞抗體,不會(huì)出現(xiàn)因補(bǔ)體激活而存在的假陽性和假陰性干擾。
      3.異嗜性抗體(heterophilieantibodies) 人類血清中含有抗嚙齒類動(dòng)物(如鼠、馬、羊等)
      的免疫球蛋白(1g)的抗體,即天然的異嗜性抗體。有研究表明,天然的異嗜性抗體(1gG)可分為兩類,一類(85%的假陽性由其引起)可結(jié)合于山羊、小鼠、大鼠、馬和牛IgG的Fab區(qū)域,但不與兔IgG的Fab區(qū)結(jié)合。另一類(15%的假陽性由其引起)可結(jié)合于小鼠、馬、牛和兔IgG的Fc區(qū)表位,但不與山羊和大鼠IgG的Pc區(qū)表位結(jié)合。異嗜性抗體可通過交聯(lián)固相和酶標(biāo)的單抗或多抗而出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。由異嗜性抗體引起的干擾可通過下述方法避免:
      (1)使用特異的兔F(ab’)2。片段作為固相或測定酶標(biāo)抗體。
      (2)在標(biāo)本或標(biāo)本稀釋液中加入過量的動(dòng)物Ig,封閉可能存在的異嗜性抗體。但加入量不足或亞類不同時(shí)無效。
      (3)使用靶特異的非Ig親和蛋白(affibody)替代固相或酶標(biāo)抗體之一。采用噬菌體展示技術(shù)展示來自單個(gè)金黃色葡萄球菌A蛋白(SPA)聯(lián)合文庫的人IgA結(jié)合親和蛋白,用于IgA的測定,不受異嗜性抗體的影響。
      (4)使用elisa試劑盒白介素類特異的雞抗體作為固相和測定抗體。
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