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      蛋白質(zhì)羰基測(cè)試盒

      簡(jiǎn)要描述:

      蛋白質(zhì)羰基測(cè)試盒是多種氨基酸在蛋白質(zhì)的氧化修飾過(guò)程中的早期標(biāo)志,其含量高低表明蛋白質(zhì)氧化損傷程度的大小,是衡量蛋白質(zhì)氧化損傷的主要指標(biāo)。

      更新時(shí)間:2024-09-03;廠商性質(zhì):經(jīng)銷(xiāo)商;覽量:1026

      商品詳情:
      蛋白質(zhì)羰基測(cè)試盒測(cè)定意義:

      蛋白質(zhì)羰基是多種氨基酸在蛋白質(zhì)的氧化修飾過(guò)程中的早期標(biāo)志,其含量高低表明蛋白質(zhì)氧化損傷程度的大小,是衡量蛋白質(zhì)氧化損傷的主要指標(biāo)。

      貨號(hào)

      規(guī)格

      檢測(cè)方法

      YSH3278

      100管/48樣

      微量法

      YSH3278-1

      50管/24樣

      紫外分光光度法

      測(cè)定原理:

      羰基與2,4-二肼反應(yīng)生成紅色2,4-二腙,在370nm處有特征吸收峰。

      自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

      天平、恒溫水浴鍋、低溫離心機(jī)、漩渦震蕩儀、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水、無(wú)水乙醇、乙酸乙酯。
      樣品中AA提取:

      1.按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行室溫勻漿,然后轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP 管中,蓋緊后(防止水分散失)置于沸水浴提取15 min;自來(lái)水冷卻后,8000g,,4℃離心10min,上清液置冰上待測(cè)。

      2.細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

      3.血清等液體:直接檢測(cè)。

      計(jì)算公式如下:

      1、血清(漿)LAP活力的計(jì)算:

      單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘生成1 nmol的對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

      LAP(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA

      2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中LAP活力的計(jì)算:

      1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

      單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

      LAP(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

      2)按樣本鮮重計(jì)算:

      單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

      LAP(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W

      3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

      單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

      LAP(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA

      V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:對(duì)硝基苯胺摩爾消光系數(shù),9.72×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.05 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,2 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;2000:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),2000萬(wàn)。

      注意事項(xiàng):

      1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標(biāo)準(zhǔn)品均需臨用前配制,且避光保存,配制好未使用完的4℃保存且3天內(nèi)使用完畢。

      2. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,需先取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),如果測(cè)定的吸光值過(guò)高(高于2.5),用蒸餾水稀釋后再測(cè)定。

      3. 與茚三酮反應(yīng)在570nm處無(wú)吸收峰,因此,570nm處測(cè)定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量。

      4.檢出限為100μmol/L。

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      土壤中性(SNPT)測(cè)試盒50管/24樣 可見(jiàn)分光光度法

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      土壤堿性(SALPT)測(cè)試盒50管/24樣 可見(jiàn)分光光度法

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